激光显微切割条斑紫菜叶状体的参数优化

作者：曹逸飞; 李小姣; 曲伟华; 茅云翔^*; 杜国英^*

来源：中国海洋大学学报(自然科学版), 2021, 51(01): 51-58.

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb.20200144

• 条斑紫菜
• 激光显微切割
• 细胞分离
• 叶绿素荧光成像技术
• 光合活性

本研究以经济红藻条斑紫菜(Pyropia yezoensis)为研究对象,应用激光显微切割技术(Laser Microdissection,LMD)分离不同时期、不同部位、不同组织紫菜叶状体细胞团。统计细胞团中成活细胞比例,测定成活率,并应用叶绿素荧光成像法测定成活细胞光合活性,建立适合不同类型细胞的激光显微切割流程。结果表明:(1)整个切割流程需要在30 min内完成,不同材料成活率由高到低为:精子囊、成熟紫菜顶部、紫菜幼苗基部、成熟紫菜基部、幼苗顶基部,同株紫菜相同区域的中央与边缘细胞切割后成活率相近;(2)显微切割获得的紫菜细胞团的各项叶绿素荧光参数中,最大光量子传递效率Fv/Fm、实际光量子传递效率Y(Ⅱ)、光化学淬灭qP下降、非光化学淬灭qN上升,其中Fv/Fm、Y(Ⅱ)变动均高于其他参数,可作为指示切割细胞团光合能力的敏感指标;(3)不同时期紫菜适用的切割技术不同:成熟条斑紫菜在10、20、63倍镜下切割的直径100～300μm细胞团,幼苗在6.3、10、20倍镜下切割的直径150～300μm细胞团,成活率高且具有较高的光合活性。本研究针对条斑紫菜不同材料摸索形成适宜的切割技术参数,最少可从100μm直径细胞团(约20细胞)中获取1～6个成活细胞,为细胞的精确分离提供了新的技术手段。

• 单位
  生命学院; 中国海洋大学; 海南热带海洋学院