德国小蠊精氨酸激酶基因的克隆、表达及免疫活性测定

作者：闫浩; 夏立新; 陈家杰; 刘娇; 邓志琼; 易海涛; 刘小平

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2011, (03): 191-194.

• 德国小蠊
• 精氨酸激酶
• 过敏原
• 克隆 Blattella germanica
• Arginine kinase
• Allergen
• Clone

目的克隆德国小蠊精氨酸激酶(arginine kinase,AK)全长基因,表达、纯化重组AK蛋白,并研究蛋白的免疫反应性。方法提取德国小蠊总RNA,反转录为cDNA,设计特异性引物,PCR克隆德国小蠊AK片段,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET-28a中,在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白表达和纯化结果,用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组AK蛋白的免疫反应性。结果德国小蠊AK基因开放阅读框全长为1...

• 单位
  深圳大学; 中南大学湘雅二医院