麦胚无细胞蛋白合成系统表达人成纤维细胞生长因子21蛋白的研究

作者：李正哲; 李力; 李杏君; 宋鑫; 郑学玲

来源：食品安全质量检测学报, 2021, 12(12): 4964-4969.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.12.038

• 小麦胚芽
• 无细胞蛋白合成
• 人成纤维细胞生长因子21
• 蛋白质纯化

目的通过构建麦胚无细胞蛋白合成系统(wheat germ cell-free protein synthesis system, WGCF)体外表达人成纤维细胞生长因子21 (fibroblast growth factor 21, FGF21)。方法构建FGF21克隆载体,对FGF21基因进行克隆,提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩大底物浓度并体外转录成mRNA。制备麦胚抽提物溶液,加入反应底物、能源物质和相关酶系构建WGCF。以mRNA为模板利用WGCF体外合成FGF21重组蛋白,利用酶联免疫吸附测定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)对纯化后的FGF21重组蛋白进行检验,并计算WGCF合成FGF21重组蛋白的产量。结果成功利用构建的WGCF表达了FGF21蛋白,最终合成产量为12.49 ng/mL。从基因层面到体外表达FGF21重组蛋白仅需2～3 d。结论以麦胚抽提物为核心的WGCF可以正确合成具有复杂结构的真核蛋白,为小麦制粉副产物麦胚的深层次开发利用提供有效手段和研究方向。

• 单位
  粮油食品学院; 河南工业大学