大肠杆菌CusS的生物信息学分析及对银离子胁迫的响应

作者：安皓月; 谭超; 沈舒楚; 伍中宝; 吴钰煌; 邓凯红; 邹黎黎; 王君

来源：微生物学报, 2024, 64(04): 1187-1202.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20230675

• 大肠杆菌
• Red同源重组技术
• 银离子
• 金属外排系统
• 传感器组氨酸激酶(CusS)
• 生物信息学分析

【目的】解析大肠杆菌(Escherichiacoli)K-12菌株同型二聚体内膜传感器组氨酸激酶(sensor histidine kinase, CusS)蛋白在细菌应答金属银离子胁迫中的调控机制，为该菌的防治提供重要科学依据。【方法】利用ProtParam、ProtScale、Protein-Sol、TMHMM、SignalP、LocTree3、NetNGlyc-1.0、NetPhosBac-3.0、SOPMA、I-TASSERF、STRING和MEGA分别预测CusS的理化性质、亲水性、可溶性、跨膜域、信号肽、亚细胞定位、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构、蛋白互作的关系网络和蛋白在革兰阴性杆菌中的同源性。采用Red同源重组技术构建大肠杆菌ΔcusS，在不同培养基中连续监测ΔcusS的生长情况，观察该基因缺失后的细菌生长活性；通过最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)试验评价该缺失株对金属铜、银离子和临床常见抗生素的敏感性变化；运用RT-qPCR检测cusS缺失后其下游基因cusCFBA和cusR转录水平。【结果】CusS蛋白由480个氨基酸组成，相对分子质量为53 738.05，原子总数为7 624，等电点为6.02，具有稳定性，是一种亲水性、不溶性蛋白；含有跨膜域；不存在信号肽，定位于细胞内膜中；存在2个糖基化位点、24个丝氨酸磷酸化位点、14个苏氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点；二级结构中α-螺旋占比55.42%,β-折叠占比11.67%,β-转角占比3.75%，无规则卷曲占比29.17%;cusS在埃希菌属和志贺菌属中的保守性高；菌落PCR和一代测序验证ΔcusS构建成功；连续检测生长曲线表明cusS缺失并不影响细菌的生长代谢，但CusS蛋白为大肠杆菌抵御金属银胁迫的关键基因。【结论】cusS作为一个关键基因，它的缺失并不影响大肠杆菌的生长活性，但会显著降低细菌抵御银离子胁迫的应答能力。缺失cusS将使下游基因cusCFBA和cusR的mRNA表达水平显著下降。对CusS蛋白进行生物信息学分析及表型初探，为深入了解CusS在大肠杆菌应答银离子胁迫的调控机制奠定了基础。

• 单位
  三峡大学; 基础医学院; 第一临床医学院