基于调控DNA序列变化的MphR(A)蛋白类ELISA系统性能提升研究

作者：程永友^*; 陈海江; 费强; 杨曙明; 刘晓夏

来源：食品安全质量检测学报, 2021, 12(24): 9445-9451.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.24.018

• 大环内酯类抗生素
• 类ELISA系统
• MphR(A)蛋白

目的考察DNA序列对利用MphR(A)蛋白和启动子mph(A)序列的结合-解离特性构建的大环内酯类抗生素的体外类酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测系统性能的影响。方法通过MphR(A)蛋白与3段野生型DNA序列及其他突变序列构建类ELISA检测系统,先通过添加和不添加红霉素作用,获得各DNA所得的最大和最小OD450,以最大与最小OD450值相差较大、最小OD450值接近0作为表现较好的标准,再对表现较好的系统计算红霉素反应的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC50)值。结果 Mph R(A)蛋白可以和不同DNA序列结合,从而获得不同的检测性能。采用突变序列AC4-DNA建立的类ELISA系统IC50值为(2.33±0.70) ng/m L,低于野生型DNA所得的IC50 [(3.95±1.18) ng/m L],系统灵敏度提升。结论通过DNA调控该类ELISA系统是一种可行的手段。此外,在野生型A-DNA、B-DNA、C-DNA均发现一段22bp伪回文结构,该伪回文结构符合Tet蛋白家族的DNA序列特征,认为是该伪回文结构是与蛋白结合的核心序列。

• 单位
  中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所; 贵阳学院