贝氏柯克斯体穿梭载体构建及转化方法建立

作者：罗声栋; 卢姗姗; 胡燕; 王涛; 于永慧; 冯乐; 孙志会; 宋立华

来源：生物技术通讯, 2016, 27(05): 625-628.

• 贝氏柯克斯体
• Q热
• 穿梭载体
• 转化
• RSF1010质粒

目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、KanR抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-KanR串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果:构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论:建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 解放军第302医院