副猪嗜血杆菌OMP5抗原免疫刺激复合物的制备及其对小鼠免疫功能的影响

作者：刘栋; 薛少华; 龙凡利; 梁蓉娟; 吴剑梅; 郑新添; 李晓华^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2023, (09): 67-79.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.04.0194

• 副猪嗜血杆菌
• 免疫刺激复合物
• OMP5
• 小鼠
• 细胞因子

为探究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白(outer membrane prtein, OMP)免疫刺激复合物(immune stimulating complexs, ISCOM)的抗原性，试验采用PCR方法扩增HPS的OMP5基因，将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，获得重组表达质粒pET-28a-OMP5;进一步以QuilA、胆固醇和磷脂酰胆碱为原料，用透析法制备HPS OMP5抗原免疫刺激复合物(ISCOM-OMP5),用其免疫ICR小鼠后检测HPS抗体水平、细胞因子基因相对表达量及淋巴细胞增殖情况，以评价ISCOM-OMP5的免疫增强效果。结果表明：构建的重组表达质粒能够成功表达目的蛋白，大小约为40 ku;制备的ISCOM-OMP5具有ISCOM的典型蜂窝状结构，直径为30～40 nm, ISCOM-OMP5蛋白的包封率达85.8%;用ISCOM-OMP5对小鼠进行免疫，二免后14天即可在小鼠血清中检测到较高水平HPS抗体；ISCOM-OMP5能极显著提高白细胞介素-10(IL-10)和γ干扰素(IFN-γ)基因的相对表达量(P<0.01),显著提高T淋巴细胞的增殖能力(P<0.05),极显著提高B淋巴细胞的增殖能力(P<0.01)。说明ISCOM-OMP5可有效诱导小鼠产生针对HPS的免疫应答，能显著增强免疫效果。

• 单位
  动物科学学院; 生命科学学院; 龙岩学院; 福建农林大学