TGFβ1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

作者：王翔; 胡治平; 卢伟; 唐湘祁; 张洁; 李婷; 曾六旺

来源：重庆医科大学学报, 2009, (01): 1-5.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.2009.01.001

• RNAi
• TGF &beta
• 1
• 慢病毒载体

目的:构建TGFβ1基因RNAi慢病毒载体。方法:根据人TGFβ1的mRNA序列选择3个靶序列并根据它们设计合成3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列;将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pRNA-U6/Lenti质粒,酶切和测序鉴定后,将以上质粒分别和包装质粒混合物共转染293FT细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Hela细胞后,运用Real-Time PCR和ELISA检测TGFβ1mRNA和蛋白的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pRNA-U6/Lenti质粒;各质粒与包装质粒共转染293FT细胞后能产生高滴度的慢病毒载体颗粒;各组慢病毒载体感染Hela细胞后,有两组可以显著抑制TGFβ1mRNA水平及蛋白水平的表达,其中以第一组效果最佳。结论:成功构建了人TGFβ1基因RNAi慢病毒载体。

• 单位
  中南大学湘雅二医院