TaqMan实时荧光定量PCR检测肠道细菌Akkermansia Muciniphila

作者：刘曼妮; 董新燕; 张玲; 刘敏; 秦倩倩; 张翔凌; 王国庆^*

来源：现代预防医学, 2019, 46(07): 1242-1247.

• Akkermansia Muciniphila
• 16S rRNA
• TaqMan探针
• 实时荧光定量PCR
• 重组质粒

目的建立Akkermansia muciniphila(A.muciniphila)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,实现粪便中A.muciniphila的定量检测。方法根据GenBank公布的A.muciniphila 16S rRNA基因高保守序列,设计合成特异引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为标准品,通过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,同时将建立的方法用于10份成年人粪便标本的检测。结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测A.muciniphila,仅需1.5h,该方法线性好,相关系数R2=0.9991,扩增效率E=94.7%;重复性好,组内和组间变异系数均小于3%;灵敏度可达到5×103拷贝/μl;特异性良好。10份成年人粪便标本共检出9份为阳性,阳性粪便标本中A.muciniphila平均含量为2.70×108cells/g粪便。结论本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR能够快速、灵敏、特异地定量检测粪便标本中A.muciniphila。

• 单位
  四川大学; 公共卫生学院