绵羊外周血间充质血干细胞的生物学特性

作者：韩超; 周祝兴; 陈有荣; 董子慧; 余家阔

来源：北京大学学报(医学版), 2022, 1-10.

• 外周血间充质干细胞
• 动员
• 生物学特性

目的：用粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF）连续动员法获取绵羊与兔外周血间充质干细胞（peripheral blood mesenchymal stem cells，PBMSCs），通过比较两种来源PBMSCs的获取成功率、细胞产量及生物学特性的差异，为PBMSCs移植修复关节软骨损伤及软骨组织工程的临床前研究提供实验依据。方法：经G-CSF连续动员获取绵羊与兔外周血单核细胞，通过形态学特征、流式法分析其表面标记、体外定向诱导两种细胞三系分化（即：成脂分化、成骨分化、成软骨分化），确证获取的细胞为PBMSCs。统计并比较两种PBMSCs的集落形成单位（colony-forming units， CFUs）、获取成功率，用血球计数板计数法统计并比较两种第2代PBMSCs的产量，用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测两种PBMSCs倍增时间，用图像处理法定量分析三系分化结果。结果：镜下见梭形绵羊和兔PBMSCs呈鱼群状排列，第2代绵羊与兔PBMSCs表达CD44、CD90，不表达CD34、CD45，三系分化结果良好。原代绵羊与兔PBMSCs 的CFUs（个）分别为7.27±1.56、5.73±1.62，绵羊与兔PBMSCs的获取成功率分别为78.57%、36.67%，每毫升外周血可获取的第2代绵羊与兔PBMSCs数（个）分别为29582±2138、26732±2286，第3代绵羊与兔PBMSCs的细胞倍增时间（h）分别为22.32±0.28、33.21±0.64，第4代绵羊与兔PBMSCs的细胞倍增时间（h）分别为23.62±0.56、35.30±0.38，绵羊与兔PBMSCs量化成脂比分别为（7.77±3.81）%、（17.05±1.52）%，绵羊与兔PBMSCs软骨球酸性粘多糖阳性比分别为（11.67±0.53）%、（8.14±0.57）%，以上各组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：经G-CSF连续动员获取绵羊PBMSCs更高效，绵羊PBMSCs产量更丰富、增殖能力更强，在适当环境下能产生更多酸性粘多糖，且成脂能力更低，在自体干细胞移植修复关节软骨损伤及软骨组织工程的临床前动物在体实验中具有良好的研究前景，并为该类研究进一步提供实验依据。

• 单位
  北京大学第三医院; 潍坊医学院