猪圆环病毒2型遗传标记毒株的构建及生物学特性鉴定

作者：刘长明; 危艳武; 张超范; 谭斌; 陆月华; 孔宪刚

来源：中国预防兽医学报, 2006, (06): 609-613.

• 猪圆环病毒2型
• 遗传标记病毒
• 生物学特性 porcine circovirus type 2
• genetic marker virus
• biological characters

以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ限制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原,其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致。鉴于新病毒基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,用PCR与限制性片段长度多态性分析法可与野生型病毒相鉴别。新毒株经细胞连续传60代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达10~(6．6)TCID_(50)/mL。取病毒培...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室