牛结节性皮肤病病毒p32蛋白膜外区可溶性表达及多克隆抗体制备

作者：黄敏霞; 翟颀; 吕殿红; 温肖会; 翟少伦; 罗胜军; 周秀蓉; 贾春玲; 魏文康

来源：动物医学进展, 2022, 43(12): 20-25.

DOI：10.3969/j.issn.1007-5038.2022.12.004

• 牛结节性皮肤病病毒
• p32蛋白
• 可溶性表达
• 多克隆抗体

为获得牛结节性皮肤病病毒(LSDV)p32可溶性蛋白并制备其多克隆抗体,截取了LSDV的P32基因膜外区序列,并构建了重组表达质粒pColdⅠ-P32,在大肠埃希氏菌BL21(DE3)pLysS细胞中经低温诱导表达,然后用钴离子亲和层析纯化以可溶性形式表达的重组蛋白,使用纯化的p32截短蛋白免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,并通过Western blot鉴定.结果表明,成功使用钴离子亲和层析纯化获得LSDV p32可溶性膜外区蛋白,制备的多克隆抗体可以特异性识别LSDV感染的牛组织蛋白.获得的纯度较高的LSDV p32截短蛋白和特异性良好的多克隆抗体,为建立LSDV抗原检测方法及亚单位疫苗的研制奠定了基础.