五子衍宗方通过调节miR-let-7-Imp轴对老龄大鼠精原干细胞增殖的影响

作者：陈茜; 赵海霞; 马娜; 刘珍财; 袁丁; 张长城^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2019, 25(03): 45-52.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20190333

• 五子衍宗方
• 精原干细胞
• 衰老
• miR-let-7-Imp

目的:通过miR-let-7-Imp轴探讨五子衍宗方(WZ)对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制。方法:将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WZ低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WZ低、中、高剂量组分别灌胃给药0. 4,0. 8,1. 6 g·kg-1,青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测miR-let-7,Imp mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光检测睾丸精原干细胞增殖相关信号通路磷酸化(p)-两面神激酶2(JAK2)/JAK2,p-信号传导及转录激活因子3(STAT3)/STAT3蛋白的表达与定位,免疫荧光检测精原干细胞数量及增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态学变化。结果:Real-time PCR结果显示,与青年组比较,老龄模型组miR-let-7 mRNA表达水平显著升高(P <0. 01),Imp mRNA表达水平显著降低(P <0. 01),而给予WZ干预后,miR-let-7 mRNA水平明显降低(P <0. 05,P <0. 01),Imp mRNA表达水平明显升高(P <0. 05); Western blot和免疫荧光结果显示,精原干细胞增殖相关信号通路蛋白p-JAK2,p-STAT3表达降低(P <0. 01),WZ处理后,p-JAK2,p-STAT3表达明显增多(P <0. 05,P <0. 01);免疫荧光结果显示,与青年组比较,老龄模型组中精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,WZ处理后,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调; HE结果也显示,WZ能够明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态结构变化。结论:WZ能够促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内miR-let-7-Imp轴有关。

• 单位
  三峡大学; 三峡大学仁和医院