Myc/his-TDP-43融合蛋白对tau外显子10可变剪接的影响

作者：缪世琛; 屈舒婷; 陆颖; 唐啸; 任梁梁; 顾建兰^*

来源：中国临床医学, 2018, 25(04): 568-572.

• 反式激活反应DNA结合蛋白
• tau蛋白
• 可变剪接
• 阿尔茨海默病

目的:构建带myc/his标签的pcDNA3.1/TDP-43及其截断体质粒,探讨myc/his-TDP-43融合蛋白对tau外显子10可变剪接的影响。方法:采用PCR法扩增TDP-43基因及其各截断体,将扩增产物和载体pcDNA3.1双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒。在HEK-293FT细胞中转染pcDNA3.1/TDP-43·myc·his及其截断体质粒,Western印迹法检测相关蛋白的表达。TDP-43或siTDP-43和tau迷你基因SI9/SI10共转,RT-PCR检测TDP-43对tau外显子10可变剪接的影响。结果:成功构建了pcDNA3.1/TDP-43·myc·his全长及各截断体质粒,并在HEK-293FT细胞中检测到其蛋白表达。Myc/his-TDP-43融合蛋白可呈剂量依赖性促进4R-tau的表达(P<0.05或0.01)。结论:Myc/his-TDP-43融合蛋白可促进4R-tau的表达,携带myc/his标签不影响TDP-43对tau外显子10可变剪接的促进作用,为后续研究奠定了基础。

• 单位
  南通大学