益气通络方含药血清通过减弱氧化应激反应和激活PI3K/AKT信号通路对PC12细胞氧化应激损伤模型的保护作用

作者：裴珍珍; 王革生; 东潇博; 杜勇; 宋光荣; 李蕊萍; 郑粲; 王清华; 郭蓉娟

来源：辽宁中医药大学学报, 2022, 1-14.

• 脑缺血再灌注损伤
• 益气通络方
• 含药血清
• 细胞凋亡
• PI3K/AKT通路

目的：研究益气通络方含药血清对过氧化氢（H_(2)O_(2)）诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：①选取SPF级健康SD雌性大鼠20只，随机分为空白组及益气通络方组。分别使用生理盐水及益气通络方灌胃7天，后腹主动脉取血离心制备空白血清及含药血清。②体外培养PC12细胞，随机分为正常组、模型组、空白血清组、益气通络方含药血清组、PI3K抑制剂组、益气通络方含药血清+PI3K抑制剂组。除正常组外，H_(2)O_(2)体外诱导构建PC12细胞氧化应激损伤模型。试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p-PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果：选择600μmol.L~(-1) H_(2)O_(2)刺激4h作为氧化损伤造模条件。①与正常组相比，模型组LDH、MDA含量增高（P＜0.01），SOD活力降低（P＜0.01），ROS细胞内分布增加。与模型组相比，益气通络方含药血清组LDH、MDA含量降低（P＜0.05），SOD活力增高（P＜0.01），ROS细胞内分布减少。②与正常组相比，模型组p-PI3K、p-AKT/AKT降低（P＜0.01），Bax/Bcl-2增高（P＜0.01）。与模型组相比，益气通络方含药血清组p-PI3K、p-AKT/AKT增高（P＜0.01），益气通络方含药血清能下调Bax/Bcl-2。与益气通络方含药血清组相比，加入PI3K抑制剂会显著抑制p-PI3K、p-AKT表达（P＜0.01），增高Bax/Bcl-2，促进细胞凋亡。结论：益气通络方能减轻氧化应激反应，上调PI3K/AKT信号通路，促进抗凋亡蛋白表达，抑制细胞凋亡途径，发挥细胞保护作用。

• 单位
  北京中医药大学东方医院