慢病毒沉默Piezo1蛋白与人骨髓间充质干细胞成骨分化及TAZ的表达

作者：韦雨柔; 田佳庆; 何宪顺; 詹芝玮; 魏腾飞; 林天烨; 何伟; 魏秋实

来源：中国组织工程研究, 2023, 1-8.

• 股骨头坏死
• 人骨髓间充质干细胞
• Piezo1
• TAZ
• 成骨分化

背景：Piezo1作为机械敏感蛋白与成骨分化密切相关，TAZ也被证明参与调节成骨分化，但Piezo1调控人骨髓间充质干细胞成骨分化时TAZ是否参与其中目前尚不明确，故研究其具体机制对防治股骨头坏死具有重要意义。目的：探讨Piezo1对人骨髓间充质干细胞成骨分化及TAZ表达的影响。方法：构建靶向Piezo1的siRNA，转染至293T细胞，通过RT-qPCR检测其沉默效率并筛选出Piezo1-Homo-2337进行包装，使用荧光染色检测其最佳感染复数值。Piezo1沉默重组慢病毒进一步被转染至人骨髓间充质干细胞中，通过RT-qPCR、Western blot检测其沉默效果；通过茜素红染色、碱性磷酸酶活性分析、免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot检测分析沉默Piezo1对人骨髓间充质干细胞成骨分化能力及TAZ表达的影响。结果与结论：(1)与正常组、阴性对照组比较，转染si-Piezo1后人骨髓间充质干细胞中Piezo1的mRNA及蛋白水平明显降低。(2)与阴性对照组比较，si-Piezo1组碱性磷酸酶活性明显降低，钙沉积明显减少。(3)与阴性对照组比较，si-Piezo1组成骨相关基因Runx2、OPN、DLX5、osteocalcin、β-catenin及TAZ的mRNA水平明显降低。si-Piezo1组TAZ、β-catenin的蛋白表达明显降低；相反，si-Piezo1组p-TAZ、p-β-catenin的蛋白表达明显增加。(4)与阴性对照组比较，免疫荧光染色结果提示si-Piezo1组人骨髓间充质干细胞中TAZ、β-catenin的表达较少。(5)结果表明Piezo1可促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化，沉默Piezo1后人骨髓间充质干细胞的成骨能力明显降低，同时TAZ的表达也同样降低。

• 单位
  广州中医药大学; 广州中医药大学第三附属医院