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摘要
目的探讨miR-492是否参与红细胞OK血型抗原表达的转录后调控。方法化学合成2个BSG基因3’UTR片段,分别包含BSG rs 8259 TT或BSG rs 8259 AA位点。合成时两端加上Xho I和Not I酶切位点,克隆至pUC57载体,随后构建至psiCHECK-2载体,测序验证。分别将不同浓度的miR-492 mimic与构建的psiCHECK2-BSG-T或psiCHECK2-BSG-A重组质粒共转染K562细胞,设置空白对照,各转染实验重复3次。利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定海肾荧光素酶活性,并按萤火虫荧光素酶活性进行均一化处理,数据统计分析。结果测序结果显示,成功构建了分别包含BSGrs 8259 TT或BSGrs 8259 AA位点的重组psiCHECK-2质粒。双荧光素酶报告基因检测结果表明,miR-492 mimic浓度大于100nmol/L时,对psiCHECK2-BSG-T有显著抑制作用。而mir-492 mimic对psiCHECK-BSG-A无抑制作用。结论 miR-492可能参与了调控BSGrs 8259 TT基因型个体红细胞OK抗原的表达。
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单位上海市血液中心
