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摘要
目的通过观察阻断糖基化终末产物受体(RAGE)效应后对小鼠糖尿病创面炎性细胞浸润及炎症因子分泌情况的影响,推测RAGE对创面炎症反应的可能影响和效应环节。方法 96只雄性8周龄C57BL/6J小鼠随机分成糖尿病组(n=72)和正常对照组(N组)(n=24)。糖尿病组小鼠多次小剂量链脲佐菌素腹腔注射,诱导糖尿病小鼠模型,并运用灭菌9 mm直径环钻于所有小鼠背部,制造全层皮肤缺损创面模型,伤后N组小鼠创面局部运用0.9%氯化钠溶液20μL,糖尿病组随机分成3组,糖尿病空白对照组(C组)局部外用0.9%氯化钠溶液20μL、糖尿病IgG对照组(I组)局部外用兔IgG 20μL、糖尿病RAGE干预组(R组)创面局部外用兔抗鼠RAGE多克隆抗体20μL。隔日分别给予上述对应的药物,直至伤后7 d。致伤当日及伤后1、3、7 d取材,制备标本待用,苏木精-伊红(HE)染色观察各组创面愈合的情况及愈合过程中中性粒细胞的浸润变化,免疫组织化学染色观察RAGE表达和巨噬细胞的浸润,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测创周组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素、白细胞介素-1α(IL-1α)、白细胞介素-6(IL-6)、髓过氧化物酶(MPO)含量;透射电子显微镜下观察创面巨噬细胞吞噬现象的情况。对数据行方差分析、t检验。结果 N组和C组小鼠皮肤组织中均可见RAGE阳性表达,且C组小鼠创面表达明显强于N组,RAGE主要分布于细胞表面。伤后14 d,R组创面愈合率为(89.65±1.49)%,明显高于C组(76.21±0.69)%与Ⅰ组(78.81±1.01)%,差异均有统计学意义(t=18.771、14.026,P值均小于0.05)。伤后1 d,N组TNF-α、IL-1α、IL-6水平均明显高于C组,差异均有统计学意义(t=5.871、34.005、17.698,P值均小于0.05);R组TNF-α、IL-1α、IL-6水平均明显高于C组,差异均有统计学意义(t=10.275、27.295、18.591,P值均小于0.05)。伤后3 d,N组TNF-α、IL-1α、IL-6水平均明显低于C组,差异均有统计学意义(t=24.758、26.674、27.275,P值均小于0.05);R组TNF-α、IL-1α、IL-6水平均明显低于C组,差异均有统计学意义(t=17.819、15.584、29.360,P值均小于0.05)。伤后1 d,MPO含量N组(444.71±28.27)pg/m L和R组(476.65±38.76)pg/m L均明显高于C组(173.73±28.27)pg/m L,差异均有统计学意义(t=11.759、10.937,P值均小于0.05);相反,伤后3 d,MPO含量N组(214.05±46.55)pg/m L和R组(267.07±52.49)pg/m L均明显低于C组(491.90±38.21)pg/m L,差异均有统计学意义(t=7.991、5.998,P值均小于0.05)。伤后3 d,中性粒细胞个数,相比于N组(35.67±5.03)个和R组(36.67±4.16)个,C组创面创周中性粒细胞数量(83.00±4.58)个明显增多,差异均有统计学意义(t=10.833、5.376,P值均小于0.05)。伤后1、3 d,CD68+细胞数量计数N组(76.60±9.07)、(121.40±9.96)个和R组(51.00±8.92)、(89.60±7.89)个均明显多于C组(15.00±4.93)、(50.00±8.40)个,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。伤后3 d,N组和R组均可探测到典型巨噬细胞吞噬中性粒细胞现象存在,而C组和R组未及此现象。结论糖尿病创面环境中,中性粒细胞的消退、早期巨噬细胞的浸润及吞噬均受到了抑制,伤后炎症因子分泌表现为早期不足和消退迟滞的现象,且均呈现RAGE途径依赖性,提示糖尿病创面早期炎症反应失调,创面迁延难愈与RAGE介导效应相关。
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