科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的研究胍丁胺对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤的影响,并探究其与NF-κB、MAPK通路及活性氧(ROS)的产生是否相关。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。MTT法检测0~4 mmol/L胍丁胺作用24 h对HUVECs细胞活力的影响。HUVECs细胞机分为:(1)空白对照组;(2)脂多糖(10μg/m L)组;(3)胍丁胺干预组:脂多糖(10μg/m L)+胍丁胺(0.125、0.5、1 mmol/L)。ELISA法检测24 h细胞上清中可溶性细胞间粘附分子-1(s ICAM-1)、可溶性血管间粘附分子-1(s VCAM-1)、可溶性E-选择素(s E-selectin)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平,确定胍丁胺最适干预浓度(1 mmol/L)。后续实验中HUVECs细胞随机分为:对照组、脂多糖(10μg/m L)组、胍丁胺(1 mmol/L)组及脂多糖(10μg/m L)+胍丁胺(1 mmol/L)共同组,作用1、6、24 h;抑制剂组即在脂多糖刺激前1 h,用10μmol/L NF-κB(PDTC)、ERK1/2(PD98059)及p38(SB203580)抑制剂进行预处理。q RT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin、MCP-1、血红素氧合酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)m RNA表达水平;DCFH-DA作为荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blot法检测细胞VCAM-1、ICAM-1、p65、磷酸化-p65(p-p65)、IκBα、p-IκBα、ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK、p-JNK蛋白表达水平。结果 (1)HUVECs经10μg/m L脂多糖刺激24 h后,上清s VCAM-1、s ICAM-1、s E-选择素、MCP-1含量明显升高(P<0.05),细胞内ROS明显增加(P<0.05);刺激6 h后各因子m RNA水平升高(P<0.05);(2)胍丁胺(1 mmol/L)干预后上述指标显著下调(P<0.05),这与p38、ERK及NF-κB信号通路抑制剂预处理细胞后的抑制效应相似;(3)胍丁胺干预组6 h HO-1 m RNA表达较脂多糖组明显增加(P<0.05),而NQO-1无明显变化;(4)胍丁胺明显抑制脂多糖刺激引起的细胞内p38、ERK、核内p65(Ser536)与胞浆IκBα磷酸化,并上调胞浆IκBα蛋白水平。结论胍丁胺可能通过抑制NF-κB、MAPK通路的激活下调粘附分子及趋化因子水平,并增强HO-1表达以减少活性氧产生对抗脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞活化及损伤。
-
单位创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室; 重庆医科大学附属第一医院; 四川大学华西医院; 中国人民解放军陆军军医大学; 大坪医院
