华支睾吸虫GST的新编码基因的克隆与纯化

作者：伍忠銮; 余新炳; **; 徐劲; 吴忠道; 王海

来源：中国公共卫生, 2004, 20(06): 34-35.

DOI：10.3321/j.issn:1001-0580.2004.06.017

• 华支睾吸虫
• 谷胱甘肽转移酶
• 克隆
• 基因表达
• 纯化

目的　扩增华支睾吸虫 (Cs)一个编码谷胱甘肽转移酶 (GST)的新基因 ,确认是否存在内含子 ,进行原核表达 ,纯化。方法　用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增CsGST基因 ,测序 ,定向克隆到原核表达载体pET- 30a(+) ,在大肠杆菌BL2 1/DE3表达 ,按照Ni-NTAagarose说明书纯化重组蛋白 ,用十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)和薄层色谱 (TLC)分析。结果　CsGST基因全长 6 39bp ,没有内含子 ,构建的原核表达质粒 pET - 30a(+) -CsGST在大肠杆菌中得到了有效表达 ,融合蛋白的分子量约为 30kDa。重组蛋白达总蛋白的33% ,纯化后的重组蛋白纯度为 97%。结论　CsGST基因没有内含子 ,在大肠杆菌中能有效表达 ,重组蛋白得到了纯化 ,为进一步研究该基因的功能打下基础

• 单位
  中山大学; 基础医学院