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摘要
目的研究吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞(AR42J细胞)凋亡的影响。方法 AR42J细胞分为空白对照组(常规培养)、吡格列酮组(40μmol/L)、雨蛙肽组(1×10-8mol/L)、吡格列酮+雨蛙肽组(40μmol/L吡格列酮+1×10-8mol/L雨蛙肽)、吡格列酮+GW9662+雨蛙肽组(40μmol/L吡格列酮+5μmol/L GW9662+1×10-8mol/L雨蛙肽)。吡格列酮、GW9662早于雨蛙肽30 min加入。在实验的3、6、12和24 h采用MTT法检测各组细胞的增殖率,采用异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率,脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,检测各组半胱天冬酶(caspase)-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9的活性,采用JC-1染色流式细胞术检测细胞的线粒体膜电位。采用单因素方差分析和LSD检验分析数据。结果作用6、12、24 h时吡格列酮组和吡格列酮+雨蛙肽组细胞的增殖活性分别为0.19±0.02、0.22±0.02、0.36±0.02和0.20±0.04、0.23±0.02、0.38±0.02,分别明显低于空白对照组(0.25±0.04、0.28±0.03、0.46±0.02,t=-3.16、-4.61、-6.25)和雨蛙肽组(0.23±0.02、0.29±0.01、0.46±0.05,t=-1.58、-4.61、-6.15,P均<0.05),吡格列酮+GW9662+雨蛙肽组细胞增殖活性(0.23±0.02、0.27±0.02、0.45±0.01)高于吡格列酮+雨蛙肽组(t=2.25、3.87、4.56,P均<0.05)。作用6、12、24 h后,异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术发现吡格列酮组和吡格列酮+雨蛙肽组细胞的凋亡率分别为(11.80±0.47)%、(9.62±2.63)%、(14.92±2.52)%和(8.78±0.47)%、(11.89±2.80)%、(14.25±2.67)%,两组间差异均无统计学意义(P均>0.05),但这两组分别明显高于空白对照组的(5.52±0.64)%、(5.30±0.97)%、(5.47±0.88)%和雨蛙肽组的(5.98±1.21)%、(7.47±0.58)%、(8.11±1.32)%,差异均有统计学意义(t对照组=9.81、4.45、10.74,t(雨蛙肽组)=4.38、7.62、6.98,P均<0.05);吡格列酮+GW9662+雨蛙肽组细胞的凋亡率[(5.82±0.26)%、(6.05±0.83)%、(9.23±0.90)%]与雨蛙肽组无明显差异,与吡格列酮+雨蛙肽组相比明显降低(t=-4.63、-10.07、-5.70,P均<0.05)。作用12 h时TUNEL染色发现,吡格列酮组的凋亡率[(3.93±0.40)%]明显高于空白对照组[(2.73±0.68)%],吡格列酮+雨蛙肽组细胞凋亡率[(8.43±1.65)%]明显高于雨蛙肽组[(2.80±0.56)%],吡格列酮+GW9662+雨蛙肽组细胞凋亡率[(3.87±0.35)%]低于吡格列酮+雨蛙肽组(t=7.93、8.92、-5.35,P均<0.05)。作用24 h时吡格列酮+雨蛙肽组细胞的半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9活性(1.28±0.05、1.38±0.04、1.53±0.09)与雨蛙肽组(1.12±0.88、1.22±0.02、0.53±0.07)相比显著升高(t=3.20、8.62、1.29,P均<0.05),经GW9662干预后,半胱天冬酶类的活性部分恢复。吡格列酮组、吡格列酮+雨蛙肽组线粒体膜电位改变细胞数目明显多于雨蛙肽处理组[(28.50±0.91)%、(28.20±2.56)%比(15.00±3.67)%,t=8.10、10.02,P均<0.05],而加入GW9662可使膜电位部分恢复[(20.67±2.20)%]。结论吡格列酮可能通过激活半胱天冬酶的活性,改变细胞膜电位促进AR42J细胞的凋亡,而其拮抗剂GW9662能部分抑制吡格列酮的促凋亡功能。
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单位上海交通大学; 中心实验室
