重组β-干扰素上调HepG2细胞表达基因抑制性消减杂交技术筛选

作者：钟彦伟; 成军; 曲建慧; 张黎颖; 郭江; 李晓东

来源：医药导报, 2006, (02): 96-98.

• 重组&beta
• -干扰素
• 抑制性消减杂交
• 反式调节 Recombinant &beta
• -interferon
• Suppression subtractive hybridization technique
• Transactivation

目的利用抑制性消减杂交技术筛选重组β-干扰素(IFN-β)上调HepG2细胞表达基因。方法以重组IFN-β2 000 U.mL-1刺激对数生长期HepG2细胞,设经0.9%氯化钠注射液作用的HepG2细胞为阴性对照组;制备HepG2细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录合成cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与阴性对照组cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行基因文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果成功构建了重组IFN-β作用HepG2后差异表达...

• 单位
  北京地坛医院; 解放军第302医院