足细胞自噬在被动Heymann肾炎发病中的作用

作者：杨凤杰; 周建华; 吕倩影; 蒲金赟; 张瑜

来源：中华肾脏病杂志, 2014, 30(01): 41-47.

• 自噬
• 足细胞
• 肾小球肾炎,膜性
• 内质网应激

目的通过膜性肾病经典的动物模型被动Heymann肾炎(PHN),探讨足细胞自噬在膜性肾病病变过程中的作用,以及自噬激活可能的细胞内机制。方法 SPF级健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为5组即对照组、PHN 2 d组、PHN 4 d组、PHN 7 d组、PHN 21 d组,建立大鼠PHN模型。采用透射电镜观察足细胞形态和自噬泡,Weibel-Gomez点计数法计数单个肾小球足细胞数量,免疫组织化学染色检测肾小球内膜攻击复合物C5b-9的沉积与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测肾小球内细胞凋亡,Western印迹法检测肾小球自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein l light chain 3,LC3)、葡萄糖调节蛋白(GRP)78、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated protein kinase R-1ike ER kinase,p-PERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun aminoterminal kinase,p-JNK)、活化转录因子6α(activating transcription factor 6α,ATF6α)的表达。结果 (1)造模后第4天起即可在肾小球内观察到C5b-9沿基底膜呈线状沉积。同时,透射电镜下可见上皮下少许颗粒状电子致密物沉积及足突融合,病变随时间呈加重趋势,至第21天可见典型膜性肾病改变。此外,尿蛋白定量结果显示,造模第3天起尿蛋白量即有明显升高,至第21天时可高达(50.6+6.0)mg/24 h。(2)造模后第21天单位肾小球足细胞绝对数目较对照组显著下降(P<0.05)。(3)caspase-3表达和TUNEL染色结果一致显示,造模后第21天肾小球内可检出凋亡的足细胞。(4)透射电镜和自噬标志LC3Ⅱ的检测结果均显示,造模后第7天和第21天足细胞的自噬水平均显著升高,但第21天LC3Ⅱ的表达较第7天有所回落。(5)造模后第2天即可检出GRP78高表达,至第7天时显著升高,而病变后期(第21天)又有所回落;同时,非折叠蛋白反应传感器下游的3条信号通路(ATF6α、p-PERK及p-JNK)也在造模早期活化,后期(第21天)同样有所回落。结论膜性肾病免疫介导的损伤可能通过激活内质网应激促使足细胞自噬增强以维持其内环境稳定和生存。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院