脊髓线粒体自噬在姜黄素减轻小鼠糖尿病神经病理性痛中的作用

作者：张创强; 王汉兵; 陈碧芸; 张磊; 黄慧慧; 李东林; 贺俭^*

来源：中华麻醉学杂志, 2022, 42(09).

• 糖尿病神经病变
• 姜黄素
• 线粒体
• 自噬

目的评价脊髓线粒体自噬在姜黄素减轻小鼠糖尿病神经病理性痛(DNP)中的作用。方法选择SPF级健康雄性C57BL/6小鼠, 2月龄, 体重20～25 g, 采用腹腔注射链脲佐菌素130 mg/kg方法制备DNP模型。取DNP建模成功的小鼠36只, 采用随机数字表法分成3组(n=12):DNP组、DNP+姜黄素组(DPR组)、DNP+姜黄素+环孢素A组(DRC组)。另取12只正常C57BL/6小鼠腹腔注射等容量生理盐水, 为正常对照组(NC组)。DPR组给予姜黄素200 mg/kg灌胃, 1次/d, 持续7 d;DRC组每次姜黄素灌胃前, 鞘内注射线粒体自噬抑制剂环孢素A 10 mg/kg, 1次/d, 持续7 d, NC组和DNP组于同时点灌胃等容量生理盐水, 1次/d, 持续7 d。于灌胃前、灌胃1、3、5、7 d时测定机械缩足反应阈(MWT)。最后1次行为学测试完成后, 取L4-6段脊髓组织, 采用JC-1法和DCFH-DA法分别联合流式细胞仪检测线粒体膜电位和ROS含量, 采用Western blot法检测微管相关轻链蛋白3(LC3)、Beclin1和P62的表达水平, 计算LC3-Ⅱ/Ⅰ比值, 透射电镜检测线粒体自噬小体, 采用免疫荧光双标技术观察LC3-Ⅱ与线粒体外膜转位酶复合体蛋白20(TOM20)共表达情况。结果与NC组比较, DNP组MWT和线粒体膜电位降低, ROS含量和LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高, Beclin1表达上调, P62表达下调(P<0.05), 线粒体自噬小体形成增加, LC3-Ⅱ和TOM20共表达增加。与DNP组比较, DPR组MWT和线粒体膜电位升高, ROS含量降低, LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高, Beclin1表达上调, P62表达下调(P<0.05), 线粒体自噬小体形成增加, LC3-Ⅱ和TOM20共表达增加。与DPR组比较, DRC组MWT和线粒体膜电位降低, ROS含量升高, LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低, Beclin1表达下调, P62表达上调(P<0.05), 线粒体自噬小体形成减少, LC3-Ⅱ和TOM20共表达减少。结论姜黄素减轻小鼠DNP的机制可能与上调脊髓线粒体自噬水平, 改善线粒体功能有关。

• 单位
  佛山市妇幼保健院; 佛山市第一人民医院