SARS冠状病毒S蛋白片段2的表达纯化与多克隆抗体的制备

作者：秦莉; 吴少庭; 王西明; 袁仕善; 黄达娜; 雷民军; 潘晖榕; 高世同; 张仁利; 屈伸

来源：中国病毒学(英文版), 2005, (03): 217-220.

• SARS
• 冠状病毒
• S蛋白
• 亲和层析
• 多克隆抗体 Severe acute respiratory syndrome(SARS)
• Coronavirus
• Spike protein
• Affinity chromatography
• Polyclonal antibody

采用RTPCR技术从SARS冠状病毒基因组扩增编码S蛋白的S2基因片段(第2170到2814位碱基),克隆到pMD18T载体并测序。用限制性内切酶消化后,S2基因亚克隆至表达载体pGEX4T2,转化大肠杆菌JM109,筛选鉴定阳性菌落。扩增培养含pGEXS2质粒的JM109大肠杆菌,经IPTG诱导,超声破菌,GSHSepharose亲和层析纯化目的蛋白,Westernblot检测SARS患者血清可以识别纯化的蛋白。用此蛋白免疫NIH小鼠,获得了高滴度抗GSTS2抗体的血清,为进一步研究SARS冠状病毒的亚单位疫苗奠定基础。

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心; 华中科技大学同济医学院