大熊猫源犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

作者：李强; 严立恒; 兰景超; 邓英; 孙珊珊; 罗娌; 史纪强; 颜其贵^*

来源：云南农业大学学报：自然科学版, 2023, 38(05): 795-802.

• 大熊猫
• 犬细小病毒
• VP2蛋白
• 原核表达
• 间接酶联免疫吸附剂测定(ELISA)

【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板，利用PCR扩增VP2基因，再用原核表达系统对VP2基因进行表达，经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原；制备并纯化兔抗大熊猫IgG，采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗，通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件，并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。【结果】原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白，将其作为间接ELISA包被抗原，抗原最佳包被质量浓度为2.0μg/mL，血清最佳稀释度为1∶400，用该方法进行检测血清样品时OD450≥0.258为阳性，反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%，高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%)，两者总符合率达到87.5%。【结论】本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法，该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好，为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。

• 单位
  四川农业大学; 成都大熊猫繁育研究基地