沉默Ki-67基因对乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药性的影响

作者：董军; 崔凤鸣^*; 刘军

来源：外科理论与实践, 2023, 28(03): 254-259.

DOI：10.16139/j.1007-9610.2023.03.013

• 乳腺癌
• Ki-67
• 多柔比星
• 凋亡
• 耐药性

目的：研究沉默Ki-67基因对乳腺癌细胞多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药性的影响。方法：研究采用MCF-7/DOX细胞和脂质体瞬时转染法，用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染和阴性对照(negative control, NC)siRNA转染体外培养乳腺癌MCF-7细胞。转染48 h后采用反转录PCR(RT-PCR)检测Ki-67 mRNA的表达。后续实验用干扰效率最高的Ki-67 siRNA。共分为3个组：MCF-7空白对照(CON组)、MCF-7 NC siRNA转染(NC组)和MCF-7 siRNA转染(siRNA组)。用RT-PCR和蛋白质印迹法检测3组细胞的Ki-67 mRNA表达和相关蛋白质表达。用不同浓度的DOX处理3组MCF-7/DOX细胞，MTT法检测细胞增殖。结果：特异性siRNA成功转染MCF-7/DOX细胞后，荧光显微镜下观察，见siRNA均匀分布在细胞质内，转染效率达85%以上。转染MCF-7 siRNA后，不同程度降低了MCF-7/DOX细胞Ki-67 mRNA表达，Ki-67蛋白的表达水平显著降低，抑制率为78.51%，与NC组和CON组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。MTT检测结果示siRNA干扰Ki-67mRNA表达后，MCF-7/DOX细胞的体外增殖能力被显著抑制。siRNA组MCF-7/DOX细胞对DOX的半抑制浓度为(7.45±0.18)μmol/L，显著低于NC组(55.19±2.86)μmol/L和CON组(56.43±4.22)μmol/L，相对于CON组的耐药逆转倍数达7.69倍(P<0.05)。siRNA组不同浓度DOX对细胞的抑制作用显著高于NC组和CON组(P<0.05)。结论：siKi-67能有效抑制Ki-67基因的表达，抑制乳腺癌MCF-7/DOX细胞增殖，以及部分逆转乳腺癌MCF-7/DOX细胞对DOX的耐药性。