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摘要
目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)缺失突变体(HBx△31)抑制Rho蛋白二磷酸鸟苷解离抑制因子α(RhoGDIα)表达的作用机制及其对肝细胞癌(HCC)转移的影响。方法选取稳定表达野生型HBx及其缺失突变体HBx△31蛋白的HCC细胞株HepG2为研究对象,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白印迹法检测HBx△31对RhoGDIα表达的影响。构建RhoGDIα启动子区系列缺失报告基因载体,与真核表达载体HA-HBx及HA-HBx△31共转染HepG2细胞,荧光素酶活性检测确定HBx△31关键作用区域。免疫共沉淀(Co-IP)鉴定HBx△31与转录因子myc相关锌指蛋白(MAZ)间的相互作用,凝胶电泳迁移率实验(EMSA)分析HBx△31对MAZ与RhoGDIα启动子结合的影响。体外迁移和侵袭实验观察RhoGDIα对HBx△31介导HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响。结果HBx△31在转录水平抑制了RhoGDIα基因的表达,其作用核心区位于其启动子的-460～-242 bp区域,对该区域3个转录因子MAZ结合位点突变分析,证实MAZ参与HBx△31对RhoGDIα的表达调控。Co-IP提示HBx△31能与MAZ相互作用,EMSA分析显示MAZ通过与RhoGDIα启动子结合发挥作用,而HBx△31增强了这种效应。体外侵袭和迁移实验表明,对照组与RhoGDIα干扰组的HepG2细胞迁移数分别为(58±5)个和(98±7)个,侵袭细胞数分别为(55±6)个和(113±6)个,差异均有统计学意义(t=18.91和t=20.12,均P<0.01);而转染HBx△31的HepG2细胞迁移数[(115±6)个]和侵袭细胞数[(102±5)个]均多于共转染RhoGDIα与HBx△31的HepG2细胞迁移数[(40±4)个]和侵袭细胞数[(42±4)个](t=18.14和t=16.31,均P<0.001)。结论HBx△31通过与MAZ相互作用增强其与RhoGDIα启动子的结合,导致RhoGDIα表达下调,从而促进肝癌细胞的侵袭和迁移。
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