摘要
目的通过体外实验及体内急性肝衰竭模型验证其肝细胞功能,为生物人工肝支持系统寻找一种可用的细胞源。方法通过Western-Blotting和激光共聚焦检测Chang Liver细胞的肝细胞特异性蛋白表达,在体外评估其肝细胞功能。采用RT-PCR从基因水平检测肝细胞功能相关基因的表达情况。采用大鼠90%肝切除术诱导急性肝衰竭模型(ALF)。取生长良好的Chang Liver细胞移植入脾脏内,并于移植后24h行90%肝切除术诱导急性肝衰竭,每隔24h采血1次,测定肝功能指标变化情况。结果在体外,Chang Liver细胞表达肝细胞特异性标志蛋白,如白蛋白(ALB)、葡糖醛酸基转移酶(UGT)及细胞色素酶P450(CYP3A4)。RT-PCR同样可检测到相关基因在mRNA水平的表达。在体内,实验组接受Chang Liver细胞移植,其长期生存率达到40%,而对照组的生存率为0。移植Chang Liver细胞的大鼠的肝功能在急性肝衰竭后24h较对照组获得明显的改善,表现为血样标本中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),胆红素和碱性磷酸酶(ALP)等肝功能指标的下降。结论 Chang Liver细胞可像正常肝细胞一样表达功能蛋白,明显改善急性肝衰竭大鼠的肝功能,改善存活率,可以作为生物人工肝支持系统较好的细胞源。
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