核受体辅活化蛋白7与自噬体蛋白LC3的相互作用

作者：汪林翠; 林琼^*

来源：江苏大学学报(医学版), 2020, 30(06): 499-509.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y200036

• 核受体辅活化蛋白7
• 自噬
• 微管相关蛋白轻链3
• LC3结合基序
• 结构域
• 基序
• 分子克隆

目的:探索核受体辅活化蛋白7(nuclear receptor co-activator 7,NCOA7)与微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)的相互作用,并确定其结合位点。方法:在胃癌AGS细胞中行质谱分析,在HEK293细胞中行GST-LC3沉淀实验,分别检测两种细胞中LC3结合蛋白;采用分子克隆法构建NCOA7不同截短体和点突变体;免疫印迹法检测NCOA7的截短体ΔN462,ΔN650,ΔN650-I749/750A质粒蛋白的表达水平; GSTLC3与NCOA7突变体的沉淀实验鉴定NCOA7与LC3的结合位点。结果:质谱分析和GST-LC3沉淀实验结果表明,NCOA7是LC3结合蛋白。免疫印迹结果显示,NCOA7不同截短体和点突变体质粒蛋白均有表达。GST-LC3与NCOA7突变体的沉淀结果显示,NCOA7 N端WEDL基序和C端WEII基序是LC3结合位点。WEII基序与LC3结合受到NCOA7的651～720位氨基酸结构抑制,是一个可调节的LC3结合位点。结论:NCOA7是LC3结合蛋白,其N端WEDL和C端WEII与LC3结合。

• 单位
  江苏大学