基于重组酶和超保真DNA聚合酶的大载体DNA的定点突变方法

作者：邓文生; 史开拓

来源：2020-02-25, 中国, ZL202010117029.3.

本发明提供基于重组酶和超保真DNA聚合酶的大载体DNA的定点突变方法,包括：(1),设计两对引物,其中一对为突变引物即MPF和MPR,这对引物的5'端互补序列长度为12-15bp,互补区可以任意引入单点或多点突变,任意长度的缺失突变,插入突变1-20bp；另一对引物是协助PCR的引物,由于这一对引物的位置可以设置在已知序列区内,是可变动的,可以在突变位点的前面或后面设置,称之为PCR可变引物PCRVF和PCRVR；(2)聚合酶链式反应设置和产物纯化；(3)重组酶连接反应；(4)转化,质粒提取和测序分析。本发明可在其互补区域取任意置换碱基,进行任意长度的缺失突变,长片段拆入突变,可以用于大载体DNA定点突变而且表现出很高突变效率。

• 单位
  武汉科技大学