三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较

作者：颜文杰; 孙文逵; 李培; 苏欣; 施毅

来源：中华肺部疾病杂志(电子版), 2015, 8(01): 7-12.

• THP-1巨噬细胞
• 腺病毒
• 慢病毒
• 细胞转染

目的探讨通过腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法转染THP-1巨噬细胞的最佳方法。方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81±2.50)%,细胞病死率为(5.17±0.44)%;MOI=800,转染效率最高,EGFP阳性率可达(86.49±6.11)%,细胞病死率为(8.80±0.54)%;MOI升至1200后,EGFP阳性率为(77.88±5.77)%,细胞病死率上升明显(14.50±0.77)%(P<0.05);慢病毒转染效率高及细胞毒性较腺病毒低,但因其病毒产量低,实验消耗病毒量大,因而影响其应用。当MOI=10时,EGFP阳性率仅为(28.09±1.67)%,细胞病死率为(4.74±0.31)%;MOI=60时,转染率最高,EGFP阳性率为(91.96±1.66)%,细胞病死率升至(7.25±0.50)%,此时病死率才有统计学意义(P<0.05)。脂质体2000对THP-1巨噬细胞毒性较大,细胞死亡率高,转染效率极低,不适合转染。结论腺病毒与慢病毒转染THP-1巨噬细胞各存在一定优劣,在实验中需酌情选择,脂质体2000不适宜转染THP-1巨噬细胞。

• 单位
  南京大学; 中国人民解放军第二军医大学; 南京军区南京总医院