真核表达质粒PIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ的构建及其在COS-7细胞中的表达

作者：杨波; 刘辉; 吴亮亮; 张丽娅; 焦顺昌

来源：现代肿瘤医学, 2010, 18(04): 643-646.

• 转化生长因子
• 受体
• 全基因合成
• 真核表达 transforming growth factor
• receptor
• full length gene synthesis
• eukaryotic expression

目的:通过oligo化学合成及PCR扩增法合成人显性抑制TGF-βⅡ型受体目的基因,并建立其真核表达载体。方法:根据Genebank数据库确定显性抑制TβRⅡ目的基因,利用化学合成法进行单链oligo的合成,PCR法将合成的oligo拼接成完整的序列,装入PMD18-T载体并转染感受态细胞DH5。经XhoI和Eco-RI酶切后连接至目的载体PIRES2-AcGFP中,转染COS-7细胞,对此质粒载体进行酶切电泳鉴定和DNA测序鉴定,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测DNTβRⅡ表达。结果:合成DNA经测序验证与目的基因一致;PIRES2-AcGFP-DNTβR...

• 单位
  中国人民解放军第二炮兵总医院; 解放军总医院