三角褐指藻F-box like蛋白基因的原核表达及蛋白纯化

作者：黄静依; 孙双; 张婷; 李锐; 兰利琼; 卿人韦^*

来源：分子植物育种, 2021, 19(12): 3829-3836.

DOI：10.13271/j.mpb.019.003829

• 三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)
• F-box like蛋白
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 蛋白质印迹法

F-box蛋白是SCF复合体的重要组成元件之一,能通过泛素蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome system, UPS)参与调控胞内蛋白降解、受体识别、信号传导等生物学过程。为了探究一个F-box like蛋白在三角褐指藻细胞周期调控过程中的作用机制,本研究从三角褐指藻中克隆得到一个F-box like蛋白基因,构建原核表达载体Tph-pET28a-F-box,将其转入大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中诱导表达,并对其诱导表达条件进行了优化,最后使用镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)对重组蛋白进行纯化并进行了生物信息学分析。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)检测。结果显示,导入大肠杆菌BL21 (DE3)的三角褐指藻F-box like蛋白基因能够被诱导表达,重组可溶性蛋白最佳诱导条件为16℃时,以浓度为0.1 mmol/L的异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导12 h,纯化后的蛋白通过Western blot鉴定,显示在相对分子质量约为72.75 kD处出现一条与预期大小相符的蛋白印迹条带。生物信息学分析结果表明,该蛋白具有F-box蛋白的典型特征,位于膜外且不含有跨膜结构域,为亲水性蛋白,α-螺旋和无规卷曲为三角褐指藻F-box蛋白二级结构的主要组成元件。本研究为进一步研究三角褐指藻F-box like蛋白的作用机制奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 生物资源与生态环境教育部重点实验室; 四川大学