实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者粪便肿瘤型M2-PK DNA及临床应用研究

作者：刘玉兰; 何凤屏; 徐新; 吴青松; 李定云; 马占忠; 郭艳乐; 唐盛; 尹卫东; 龚海涛; 刘艺; 林恒先

来源：国际检验医学杂志, 2017, 38(11): 1444-1446.

DOI：10.3969/j.issn.1673-4130.2017.11.002

• 结直肠癌
• 粪便
• 肿瘤型M2丙酮酸激酶
• 实时荧光定量聚合酶链反应

目的建立适用于结直肠癌患者粪便标本肿瘤型M2丙酮酸激酶(M2-PK)DNA检测的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法,分析自建方法的临床应用价值。方法采用PCR方法扩增肿瘤型M2-PK DNA片段(162bp),纯化后采用TA克隆法转入PGM-T载体,构建重组质粒。以重组质粒为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,评价自建方法的敏感性、特异性和重复性。选择2014年1月至2016年6月确诊的结直肠癌患者200例,同期体检健康者100例,采用自建方法对受试者粪便和血清标本进行肿瘤型M2-PK DNA检测,并与酶联免疫吸附法肿瘤型M2-PK检测结果进行比较。结果测序结果证实重组质粒构建成功。自建方法检测肿瘤型M2-PK DNA的灵敏度为10copy/mL,对肌肉型M2-PK DNA和M1型丙酮酸激酶(M1-PK)DNA检测结果为阴性,批内及批间变异系数为0.3%2.9%。实时荧光定量PCR检测患者粪便标本肿瘤型M2-PK DNA阳性率为92.50%,ELISA检测肿瘤型M2-PK阳性率为80.00%。粪便和血清标本肿瘤型M2-PK DNA实时荧光定量法检测结果与肿瘤病理分期密切相关。结论本研究建立的实时荧光定量PCR法适用于结直肠癌患者粪便标本肿瘤型M2-PK DNA检测,具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于结直肠癌早期诊断。

• 单位
  汕头大学医学院; 粤北人民医院; 深圳市迈科龙生物技术有限公司