抗人胱抑素C单克隆抗体制备及免疫检测体系建立

作者：余易展; 羊婷婷; 刘培; 王念超; 卢彦; 黄亚红; 沈萍萍

来源：卫生研究, 2017, 46(04): 628-632.

DOI：10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2017.04.019

• 人胱抑素C
• 单克隆抗体
• 竞争ELISA

目的获得人胱抑素C(cystatin C,CysC)重组蛋白,制备亲和力高、特异性强的单克隆抗体,建立检测人血清中CysC的竞争ELISA检测体系。方法根据美国国立生物技术信息中心(NCBI)CysC基因序列优化合成CysC基因片段,并在大肠杆菌中表达得到CysC重组蛋白,免疫Balb/c小鼠后,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗并进行纯化,通过间接ELISA法检测抗体的亲和力等性质,建立竞争ELISA检测体系,并对52个血清样本进行检测。结果获得了4株稳定分泌CysC单克隆抗体的细胞株,将抗体Ab3作为检测抗体并进行辣根过氧化物酶标记,其亲和力为4.26×106L/mol,检测线性范围为0.0111.924μg/mL,检测限为4.598 ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.145μg/mL。建立的竞争ELISA血清检测体系能准确检测52个血清样本。结论获得了亲和力、特异性较高的单克隆抗体,建立了可靠的竞争ELISA血清检测体系,为CysC快速免疫检测试剂盒的研制奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 南京大学; 医药生物技术国家重点实验室