核苷磷酸化酶的工程菌构建

作者：段佩玲; 王振宇; 刘国生

来源：郑州铁路职业技术学院学报, 2022, 34(04): 60-67.

DOI：10.13920/j.cnki.zztlzyjsxyxb.2022.04.009

• 嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)表达
• 工程菌
• 基因克隆与表达

使用PCR扩增技术对来源于AEM0812菌株的核苷磷酸化酶基因进行扩增。利用克隆载体pD18-T进行连接，构建重组质粒pMD18-T-deoD,再将其导入Escherichia coli DH5α菌体内，克隆目的基因。利用表达载体pET-28a与目的基因构建重组质粒pET-28a-deoD,导入E.coli BL21(DE3)菌体内，获得工程菌E.coli(deoD)。利用IPTG进行诱导表达，采用SDS-PAGE方法检测到在大约27 KD处出现了明显的蛋白条带，其分子量与已知的嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)的分子量(25.82 KD)一致，这表明在E.coli(deoD)中成功表达出deoD基因，同时表明成功构建了嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)工程菌。

• 单位
  河南师范大学; 郑州铁路职业技术学院; 生命科学学院