双峰驼CYP2J cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析

作者：贾志鹏; 彭小彬; 罗查干; 哈斯苏荣^*

来源：畜牧兽医学报, 2018, 49(10): 2133-2144.

• 双峰驼
• CYP2J
• 生物信息学分析
• 组织表达

旨在研究双峰驼CYP2J基因及其编码蛋白的结构和功能。本试验首先通过RACE和RT-PCR技术,扩增得到双峰驼CYP2J基因cDNA全长。然后利用生物信息学方法,对该基因编码的蛋白特征进行分析,并使用MEGA 6软件构建双峰驼CYP2J蛋白与相关物种CYP2J蛋白的进化树。最后利用实时荧光定量PCR测定CYP2J基因在双峰驼各组织的表达量差异。结果表明,双峰驼CYP2J基因cDNA全长为1 770bp,其中完整开放阅读框(ORF)为1 509bp,共编码502个氨基酸。生物信息学分析结果表明,其ORF编码的蛋白为一种稳定的亲水性蛋白,且不具有信号肽识别功能,但有一个跨膜区域(1235位氨基酸残基),主要定位在内质网上。该蛋白一些重要的理化特性如分子式、等电点(pI)、相对分子质量、正电荷的氨基酸残基数(Arg+Lys)和负电荷的氨基酸残基数(Asp+Glu)分别为C2645H4099N713O726S15、8.45、57 983、59、56。其二级结构主要由46.41%的α-螺旋、13.15%的延伸链和40.44%的无规则卷曲组成。进一步进化树分析表明,双峰驼CYP2J蛋白与羊和牛的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR检测表明,CYP2J基因在所检测的双峰驼各组织均有表达,其中在肝和胰腺的表达量高,其次是肾、肺、心、小肠和血管,而在脾和大肠的表达量较低。因此,本研究成功获得了双峰驼CYP2J基因cDNA的全序列及其开放阅读框(ORF)所编码蛋白的生物学信息,为下一步双峰驼CYP2J蛋白和抗体的制备奠定了基础。

• 单位
  农业部; 内蒙古农业大学