4-戊基苯酚单克隆抗体的制备及其可变区的同源建模

作者：成磊; 吴海珍; 费静; 张鲁嘉; 叶江; 张惠展

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2017, 33(03): 390-399.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008085

• 4-戊基苯酚(4-AP)
• 单克隆抗体
• 间接竞争ELISA(ic-ELISA)
• 同源建模
• 分子对接

目的制备4-戊基苯酚(4-AP)单克隆抗体(mAb),通过分子生物学方法对其可变区cDNA克隆和同源建模,为4-AP单链抗体制备及抗体分子层面改造奠定基础,同时为4-AP的免疫学检测提供一种新方法。方法将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出F10阳性单抗细胞株。通过其mRNA的抽提,克隆出可变区cDNA序列,利用生物软件进行同源建模和分子对接。结果在最适条件下,其间接竞争ELISA(ic-ELISA)公式为y=A2+(A1-A2)/(1+(x/x0)p)(A1=1.28;A2=-0.07;x0=12 560.75;p=0.74),相关系数(R2)为0.997,其最低检测限为0.65μg/mL。mAb重链和轻链分别属于IgG1型和Kappa型,其与4-AP的结合力为氢键和疏水作用。结论成功制备出1株稳定分泌的4-AP mAb的杂交瘤细胞株。通过同源建模对抗体可变区空间结构进行深入研究,为单链抗体及抗体改造提供参考,同时为4-AP含量检测提供新方法。

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学