猪UGT 1A1酶基因的克隆、表达及其对呕吐毒素特异性降解的作用

作者：贺卫华; 陈诗琪; 王丽华; 丁斓; 翟晓虎^*; 杨俊花^*

来源：江苏农业学报, 2023, 39(08): 1722-1728.

• 呕吐毒素(DON)
• 葡萄糖醛酸缀合物
• 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)
• 猪肝脏

为了在Sf9昆虫细胞中表达猪尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1蛋白并对其进行功能鉴定。首先，合成密码子优化的UGT 1A1基因，克隆到载体pFastBacⅠ中，构建杆状病毒重组转移载体，然后导入DH10Bac中，获得重组的穿梭质粒，再转染Sf9细胞得到重组杆状病毒，采用Western blotting方法鉴定重组后UGT 1A1蛋白的表达；对镍柱亲和层析纯化获得目的蛋白酶的动力学参数及其对呕吐毒素(DON)的代谢进行检测。结果表明：pFastBac-UGT 1A1质粒被成功构建，导入感受态细胞DH10Bac中获得重组穿梭质粒Bacmid-UGT 1A1,再转染昆虫细胞Sf9获得重组Bacmid-UGT 1A1蛋白，能够与多组氨酸标签单抗发生特异性反应。优化目的蛋白表达，并对其体外代谢DON进行了酶学性质和动力学参数的研究。本研究通过基因克隆、表达和代谢产物的分析等技术手段获得具有较好的生物活性且纯化的Bacmid-UGT 1A1蛋白，为揭示DON在肝脏中的代谢途径、代谢产物和关键调控因子提供参考。

• 单位
  上海市农业科学院; 江苏农牧科技职业学院