表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化

作者：张煜彬; 吴忠秀; 何彬; 杨畅; 李勇军; 刘亭^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2021, 37(01): 73-78.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009135

• 表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)
• PD0721
• 间接ELISA
• 单链抗体

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL～480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%～0.99%,组间差异系数为0.68%～3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。

• 单位
  贵州医科大学