TGF-β1调控人肺泡上皮细胞中DNA甲基化酶和端粒酶的机制

作者：孙梓越; 钱力; 李丹; 朱瑞芳; 韩永康; 刘学军^*

来源：护理研究, 2023, 37(12): 2138-2143.

• 特发性肺纤维化
• 转化生长因子-β1
• A549细胞
• 脱氧核糖核酸甲基化
• 端粒酶逆转录酶

目的:通过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺泡上皮细胞A549观察脱氧核糖核酸(DNA)甲基化酶和端粒酶的变化。方法:采用TGF-β1诱导A549细胞建立体外肺纤维化模型，分为对照组、TGF-β1 2μmol/L干预组、TGF-β15μmol/L干预组和TGF-β1 10μmol/L干预组。采用β-gal染色法检测细胞衰老程度；酶联免疫吸附测定(ELISA)法和逆转录荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测炎症因子白细胞介素-1β、白细胞介素-6表达变化；RT-qPCR检测I型胶原蛋白(COL-I)、纤维连接蛋白1(FN1)、张力蛋白C(Tensin-C)、DNA甲基转移酶(DNM)T3a、DNMT3b、钙黏蛋白(CDH1)及端粒酶逆转录酶信使核糖核酸(mRNA)的表达；蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测端粒酶逆转录酶蛋白表达。结果:对照组几乎未见衰老细胞，干预组细胞衰老程度随TGF-β1浓度升高而增加；TGF-β1干预组白细胞介素-1β、白细胞介素-6含量明显升高(P<0.05)；对照组A549细胞形态呈典型的上皮细胞样形态，TGF-β1干预组出现典型的间质细胞样形态，Masson染色结果显示对照组细胞几乎未见蓝色胶原蛋白，而TGF-β1干预组蓝染胶原蛋白表达明显增多，发生纤维化改变；TGF-β1干预组与对照组比较，COL-I、FN1、Tensin-C、DNMT3a、DNMT3b mRNA表达明显升高(P<0.05)，端粒酶逆转录酶和CDH1基因mRNA的表达降低(P<0.05),Western Blot进一步验证端粒酶逆转录酶蛋白表达降低(P<0.05)。结论:TGF-β1导致A549细胞发生衰老，并促进炎症因子和致纤维化因子高表达发生纤维化改变；TGF-β1促进了DNA甲基化酶的表达，抑制了端粒酶逆转录酶的表达。

• 单位
  山西医科大学; 山西医科大学第一医院