禽腺病毒4型fiber-2与8b型fiber截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性分析

作者：迟丽丽; 王君娜; 张宇名; 刘健; 陈志远; 李树凡; 尹燕博; 徐守振^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5162-5170.

• 禽腺病毒
• 纤突蛋白
• 原核表达
• 亚单位疫苗

利用原核表达系统表达Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)fiber2和8b型(FAdV-8b)fiber全长蛋白、截短蛋白及二价融合蛋白，并评价其免疫原性。基于FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber抗原性好的截短片段(FP和BP),利用SOE-PCR构建二价融合片段(BP-FP),分别对截短蛋白、融合蛋白及全长(FL和BL)在大肠杆菌中进行表达，采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。纯化后的重组蛋白免疫SPF鸡并攻毒，计算各组存活率、间接ELISA检测免疫鸡血清抗体水平、qPCR检测泄殖腔拭子排毒量和肝脏中细胞因子IL-4、IFN-γ和TNF-α mRNA表达水平以及进行组织病理观察。结果显示：构建的重组质粒均在大肠杆菌中成功可溶表达；BP-FP4组存活率为58.3%,其他组存活率均为100%;全长组(FL组和BL组)抗体水平均高于各自片段组(FP组和BP组),但差异不显著(P>0.05);攻毒后3和7 d C8b组排毒量均显著高于免疫组(P<0.05),攻毒后7 d BP-FP8b组排毒量显著高于BP和BL组(P<0.05),BL组和BP组差异不显著(P>0.05);免疫组IL-4、IFN-γ和TNF-α mRNA表达均显著高于阴性对照组(P<0.05),FL组IFN-γ和TNF-α mRNA表达均显著低于BP-FP4组(P<0.05),FL组和FP组差异不显著(P>0.05),BL组IL-4和IFN-γ mRNA表达均显著低于BP-FP8b组(P<0.05)。组织病理观察发现，攻毒组肝脏病变最严重，FP组与BP组次之，FL组与BL组无明显病变。本研究表明FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber的全长蛋白和截短蛋白免疫保护效果优于融合蛋白，截短蛋白可替代全长蛋白用于制备禽腺病毒亚单位疫苗。

• 单位
  青岛农业大学