单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用

作者：王金凤; 刘立兵; 耿云云; 石蕊寒; 孙晓霞; 南汇珠; 姜彦芬; 王建昌^*

来源：现代食品科技, 2018, 34(08): 213-98.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2018.8.031

• 单核细胞增生李斯特氏菌
• real-time RPA
• hlyA基因
• 食品安全

本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增。该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5×10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致。人工污染实验中,对于LM接菌量为3 CFU/25 g的羊肉和生菜样品,增菌14 h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者。本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义。

• 单位
  河北师范大学; 河北出入境检验检疫局; 生命科学学院