半乳糖凝集素-3(Gal-3)在卵巢癌细胞系中的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

作者：张蕊; 张瑾^*; 安娜

来源：中国免疫学杂志, 2021, 37(16): 1967-1978.

DOI：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.16.010

• 卵巢癌
• 半乳糖凝集素-3
• 自然杀伤细胞

目的:探究半乳糖凝集素-3(Gal-3)在卵巢癌细胞系中的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响及机制。方法:Western blot、流式细胞术及ELISA检测Gal-3在正常卵巢上皮细胞IOSE80与上皮性卵巢癌细胞系Hey、ES2及与SKOV3中的表达;分离纯化健康志愿者外周血中NK细胞,流式细胞术进行鉴定;采用人重组可溶性Gal-3蛋白处理NK细胞,流式细胞术及免疫共沉淀方法检测NK细胞表面NKp30表达及Gal-3与NKp30的相互作用方式;分别采用BSA、Gal-3及Gal-3+NKp30-Fc融合蛋白孵育NK细胞,将其与SKOV3进行共培养,流式细胞术及LDH释放法检测不同处理条件下NK细胞CD107a表达及NK细胞对SKOV3的杀伤活性;采用小干扰RNA(siRNA)靶向沉默SKOV3细胞中Gal-3表达,Western blot检测转染效率,LDH释放法检测NK细胞对转染后的卵巢癌细胞杀伤活性变化。结果:与IOSE80细胞相比,EOC细胞系Hey、ES2及与SKOV3中Gal-3表达显著提高(P<0.01),选取Gal-3表达相对较高的SKOV3细胞进行后续实验;Gal-3主要表达于SKOV3细胞质,且可以外分泌的方式被释放至周围环境;Gal-3以特异性结合的方式显著降低NK细胞表面NKp30表达(P<0.01),并显著削弱NK细胞对SKOV3的杀伤活性(P<0.05),而NKp30-Fc可显著逆转Gal-3的上述作用(P<0.05),siRNA沉默Gal-3表达同样可恢复NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:卵巢癌细胞质中高表达的Gal-3可以外分泌的方式释放至周围环境,通过抑制NK细胞表面受体NKp30表达下调NK细胞免疫功能,从而促进卵巢癌细胞免疫逃逸。

• 单位
  首都医科大学附属北京世纪坛医院