非对称二甲基精氨酸水解酶的表达纯化及其酶学性质的研究

作者：赵志敬; 王学忠; 沈文婷; 胡广

来源：中国生物工程杂志, 2013, 33(04): 46-53.

DOI：10.13523/j.cb.20130408

• DDAH
• ADMA
• 蛋白纯化
• 酶学性质

非对称二甲基精氨酸水解酶(dimethylarginine Dimethylaminohydrolase,DDAH)是酶学循环法检测早期急性心肌梗塞(acute myocardial infarction,AMI)的生物标记物——非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的重要工具酶。为获得高活性DDAH,从绿脓杆菌的基因组中扩增目的基因,构建高效表达DDAH的重组菌E.coli BL 21(pET-28a-DDAH)。该菌的可溶性DDAH表达量达100mg/L,经超声破碎后的上清液通过镍柱纯化,可获得纯度达到95%以上的重组DDAH。Q柱的精制可提高它的稳定性,使其能够在常温下长期保持酶活。该重组酶的单位酶活,Km值和Vmax分别为0.5U/mg,3.04 mM和8.07mM/h。最适反应温度和pH分别为35℃和pH=6,在10℃～40℃和pH5.0～pH9.0的范围内稳定。该重组酶可形成多聚体,但并不影响酶活。最后,利用发酵罐扩大生产规模,有望进行克级生产,为新型ADMA检测试剂盒的开发和药物筛选模型提供材料基础。