PTH单克隆抗体的制备与初步应用

作者：王辉; 徐叶; 汪子力; 彭惠芳; 曾璇; 李明勇; 刘利辉; 王庆林; 刘如石

来源：生命科学研究, 2022, 26(06): 1-9.

DOI：10.16605/j.cnki.1007-7847.2021.10.0215

• 甲状旁腺激素
• 杂交瘤细胞
• 单克隆抗体
• 酶联免疫吸附
• 检测方法

甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)是一种只有84氨基酸（amino acid，aa）的直链多肽激素，是调节钙磷代谢的主要激素之一。临床上通过测定PTH来评估骨转换、肾脏疾病以及血液透析患者的预后。本研究旨在通过制备抗PTH的单克隆抗体并建立一种快速检测PTH的方法。首先以化学合成法合成PTH多肽并且将多肽偶联至血蓝蛋白（Keyhole Limpet Hemocyanin，KLH）上，通过皮下注射的方式免疫BALC/c 小鼠，采用间接酶联免疫分析法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）筛选抗PTH单克隆抗体杂交瘤细胞。经过杂交瘤细胞的筛选、亚克隆，共获得5株稳定分泌抗PTH的单克隆抗体。采用腹水法制备抗PTH单克隆抗体，用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法以及亲和层析法纯化单克隆抗体。经过抗体配对筛选，以9B6和22E8抗体分别作为捕获抗体与酶标抗体，建立了双抗体夹心ELISA检测PTH方法。在保证灵敏度的情况下对所建立的方法进行了工作浓度的优化，该方法的检测灵敏度可达0.14 ng/mL；在0.5 ng/mL～8 ng/mL的范围内，其R~(2)达到了0.985 8，有着较好的线性；还检测了其精密度在10%以下，保证了批间的稳定性。本研究成功制备了抗PTH的单克隆抗体，建立酶联免疫分析方法检测PTH，为研究PTH定量检测方法的建立以及PTH的生物学功能研究奠定了重要基础。

• 单位
  中南大学湘雅医学院; 湖南师范大学; 湖南远璟生物技术有限公司; 湖南省药品审评认证与不良反应监测中心