成骨不全XV型WNT1基因突变影响成骨细胞分化的机制

作者：张拔山; 李荣; 王文锋; 周雪明; 罗北京; 朱梓年; 张锡波; 丁爱娇

来源：分子诊断与治疗杂志, 2021, 13(04): 526-530.

DOI：10.19930/j.cnki.jmdt.2021.04.005

• 成骨不全
• 成骨细胞
• WNT1
• 基因突变
• β-catenin

目的探讨成骨不全(OI)XV型患者中,WNT1 c.110T>C/p.I37T和c.505G>T/p.G169C错义突变对WNT1/β-catenin信号通路影响成骨细胞增殖分化的机制。方法构建野生型WNT1、WNT1c.110T>C突变体、WNT1 c.505G>T突变体、WNT1 c.884C>A突变体(阳性对照)和空质粒(载体,阴性对照)转染成骨前细胞(MC3T3-E1)。MTS法检测WNT1基因突变对细胞活性的影响,实时定量PCR(qPCR)和免疫印迹法(WB)分别检测BMP2和RANKL(成骨细胞和破骨细胞分化标志物)的表达。采用qPCR、WB和免疫荧光(IF)检测成骨细胞中WNT1的m RNA、蛋白表达水平与WNT1/β-catenin信号通路相关的蛋白表达水平。结果转染24 h后,WNT1野生型细胞活性显著高于空载组、c.505G>T及c.884C>A突变组,转染48 h后,c.110T>C和c.505G>T突变细胞活性较WNT1野生型细胞显著降低,差异有统计学意义(PC和c.505G>T突变株中BMP2基因的表达显著水平降低,RANKL基因的表达显著升高,差异有统计学意义(PC和c.505G>T突变可能通过抑制WNT1/β-catenin信号通路影响成骨细胞增殖和成骨表型,这可能与OI有关。

• 单位
  南方医科大学