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摘要
目的:通过分离并提纯非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠原代肝细胞以及原代Kupffer细胞建立体外NASH原代细胞模型，为研究NASH提供可靠的细胞实验技术支持。方法:选择SD大鼠40只，随机分为2组(n=20):对照组和NASH组，对照组大鼠利用普通饲料喂养，NASH组大鼠利用高脂饲料(88%基础饲料+10%猪油+2%胆固醇)喂养，6～8周后，利用NASH评分表，病理观察下肝组织切片脂肪变+小叶内炎症+气球样变评分≥4分，表明大鼠NASH模型的成功建立，利用胶原酶原位灌注法分离并提纯NASH模型大鼠原代肝细胞以及原代Kupffer细胞，利用CK-18及CD68免疫荧光以及墨汁吞墨实验进行细胞鉴定，利用油红O染色、试剂盒测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量观察NASH大鼠原代肝细胞脂质累积和肝功情况，Western blot检测原代Kupffer细胞炎症因子表达情况，最后采用原代肝细胞：原代Kupffer细胞=6∶1比例共培养，显微镜下观察细胞状态。结果:实验成功分离并提纯NASH原代肝细胞以及原代Kupffer细胞，通过油红O染色，NASH组大鼠原代肝细胞存在明显的脂肪沉积，且NASH组大鼠原代肝细胞中AST、ALT明显高于对照组，存在明显肝损伤(P<0.05),Western blot测定原代Kupffer细胞TNF-α、IL-1β以及MCP-1,NASH组大鼠明显高于对照组(P<0.05)。结论:通过胶原酶原位灌注法可以成功分离NASH大鼠原代肝细胞以及原代Kupffer细胞，同时成功建立比例共培养大鼠体外原代细胞NASH模型。
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