牛冠状病毒纳米PCR检测方法的建立及初步应用

作者：孙飞雁; 李智杰; 魏宇; 孙亮; 王喜伟; 王楠; 叶京飞; 冯二凯; 郭利^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(10): 1221-1226.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0180

• 牛冠状病毒
• nano-PCR
• 快速诊断

为了更加快速地检测牛冠状病毒(BCoV),本试验根据BCoV的具有较高保守性的N基因序列设计1对特异性引物,结合纳米金颗粒材料,通过反应条件和体系优化,建立一种新型的快速灵敏的BCoV检测方法,并应用于临床检测。特异性试验与敏感性试验结果表明,本试验建立的nano-PCR方法对BCoV特异,与牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)均无交叉反应。nano-PCR的敏感性是普通PCR的100倍,普通PCR最低核酸检测量为2.24×103copies/μL,nano-PCR最低核酸检测量为2.24×101copies/μL。应用所建立的方法对采集的43份腹泻牛的粪拭子、鼻拭子、肺部组织样品进行检测,检出BCoV阳性样品17份,普通PCR检出阳性样品11份,两种方法的符合率为100%。此次建立的nano-PCR在检测牛冠状病毒时具有更高的特异性和敏感性,对临床上的快速诊断及检测具有一定的意义。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院特产研究所